| 王明婧,范晨晨,王倩,等.基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的抗体-细胞偶联物构建[J].中国海洋药物,2023,42(1):49-56. |
| 基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的抗体-细胞偶联物构建 |
| A sialyldase and fucosyltransferase based method for the Construction of Antibody-Cell Conjugates |
| 投稿时间：2022-02-21 修订日期：2022-04-06 |
| DOI： |
| 中文关键词: 曲妥珠单抗 岩藻糖基化 Jurkat细胞 唾液酸 生物正交反应 |
| English Keywords: |
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| 中文摘要: |
| 目的 通过基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的糖链工程将曲妥珠单抗高密度地偶联到人外周血白血病T细胞Jurkat细胞，并评价偶联细胞对HER2+靶细胞的识别活性。方法 首先通过凝集素染色和流式细胞术探究去唾液酸化对细胞上α1,3FucT催化的岩藻糖编辑效率的影响。然后制备含有叠氮标签的曲妥珠单抗，与GDP-炔基岩藻糖通过生物正交反应构建GDP-岩藻糖-抗体偶联物。再利用α1,3FucT将GDP-岩藻糖-抗体偶联物转移至唾液酸酶处理过的细胞表面，构建抗体-细胞偶联物，并通过流式细胞术和共聚焦成像验证。最后通过荧光成像观察抗体-细胞偶联物对靶细胞SK-BR-3细胞的识别。结果 细胞表面糖链的末端α2,6唾液酸切除后能够显著提升α1,3FucT催化的岩藻糖编辑的效率，成功制备GDP-岩藻糖-抗体偶联物并转移至细胞表面得到曲妥珠单抗-Jurkat偶联物，去唾液酸化显著增加了Jurkat细胞偶联曲妥珠单抗的容量，构建的曲妥珠单抗-Jurkat偶联物具备HER2+细胞靶向性。结论 细胞糖链工程可实现细胞偶联分子容量的调节，应用于抗体对免疫细胞的功能化，也为构建海洋糖类活性化合物偶联细胞提供了新的思路。 |
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