魏明月,田银,吴科锋,等.基于抗氧化反应元件高通量药物筛选细胞模型的建立及应用[J].中国海洋药物,2025,44(1):39-48.
基于抗氧化反应元件高通量药物筛选细胞模型的建立及应用
Establishment and application of a cell model for high-througut screening of secondary metabolites of mangrove fungi based on ARE fluorescence expression
投稿时间：2023-10-01  修订日期：2023-12-01
DOI：10.13400/j.cnki.cjmd.2025.01.001
中文关键词:  ARE  药物筛选模型  红树林真菌  抗氧化
English Keywords:
Fund Project:
作者单位E-mail
魏明月 广东医科大学海洋医药研究院、自然资源部第三海洋研究所、南方海洋科学与工程广东省实验室（湛江） 2910621301@qq.com 
田银 自然资源部第三海洋研究所 695722150@qq.com 
吴科锋 广东医科大学海洋医药研究院、南方海洋科学与工程广东省实验室（湛江） winokhere@sina.com 
汤熙翔* 广东医科大学海洋医药研究院、自然资源部第三海洋研究所 tangxixiang@tio.org.cn 
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中文摘要:
      摘 要：目的 利用抗氧化反应元件（Antioxidant response element, ARE）调控萤火虫荧光素酶报告基因的表达，建立高通量药物筛选细胞模型，筛选出具有潜在抗氧化活性的红树林真菌来源微生物次级代谢产物。方法 构建ARE调控萤火虫荧光素酶表达的重组质粒pGL6-TA-2×ARE，并与内参质粒pRL-SV40-C瞬时共转染小鼠精母细胞GC-2spd(ts)细胞，富马酸二甲酯（Dimethyl fumarate, DMF）为激活剂，建立基于双荧光素酶报告基因的体外药物筛选体系。对107个福建漳江口红树林沉积物来源真菌的发酵粗提物进行活性筛选；2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐（AAPH）刺激GC-2spd(ts)细胞建立体外氧化应激模型；CCK-8法检测粗提物对GC-2spd(ts)的细胞活力和AAPH氧化应激处理后粗提物对细胞活力的影响。结果 成功建立ARE调控萤火虫荧光素酶表达的细胞高通量药物筛选细胞模型，从107份红树林真菌次级代谢产物中发现3个菌株次级代谢产物在25、50和100 μg/mL时显著激活ARE水平表达且呈剂量依赖性，并抑制了AAPH诱导的细胞损伤。结论 基于ARE筛选体系及氧化应激细胞模型发现菌株编号分别为米H1509干、米H366干、米H346干的红树林真菌次级代谢产物可增强ARE荧光表达水平，发挥潜在抗氧化活性。
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