| 任雯,王小月,冯世涛,等.抗GPC3鲨鱼纳米抗体的发现与表征[J].中国海洋药物,2025,44(6):63-69. |
| 抗GPC3鲨鱼纳米抗体的发现与表征 |
| Discovery and Characterization of Anti-GPC3 Shark Nanobodies |
| 投稿时间：2024-03-25 修订日期：2024-05-07 |
| DOI：10.13400/j.cnki.cjmd.2025.06.007 |
| 中文关键词: 肝细胞癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 鲨鱼纳米抗体 |
| English Keywords: |
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| 中文摘要: |
| 目的 开发靶向GPC3的鲨鱼纳米抗体。方法 通过使用重组人GPC3蛋白免疫条纹斑竹鲨,通过间接ELISA检测免疫后鲨鱼血浆的抗体效价。获取鲨鱼脾脏总RNA后,构建免疫鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库,并利用该文库进行靶向GPC3鲨鱼纳米抗体的淘选。使用原核表达系统表达并纯化最终得到鲨鱼纳米抗体,通过ELISA法检测鲨鱼纳米抗体和重组人GPC3蛋白结合情况,通过细胞免疫荧光实验与流式细胞术实验检测鲨鱼纳米抗体和高表达GPC3的细胞株HepG2的结合情况。结果 鲨鱼血清中针对人GPC3蛋白的抗体效价为1:1600。本研究构建了库容量为6×108 CFU的鲨鱼纳米抗体噬菌体展示文库,从中筛选得到了一株鲨鱼纳米抗体命名为VNAR-F10,该抗体能特异性结合人GPC3蛋白和高表达GPC3的细胞株HepG2。结论 VNAR-F10和人GPC3蛋白以及HepG2细胞都具有较好的亲和力,为后续开发靶向GPC3的肝癌抗体药物和诊断试剂奠定了基础。 |
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