| 解慧琳,吴中秋,王蕊红,等.PD-L1纳米抗体在大肠杆菌中的高效分泌表达、纯化及活性验证[J].中国海洋药物,2026,(2):-. |
| PD-L1纳米抗体在大肠杆菌中的高效分泌表达、纯化及活性验证 |
| Efficient secretory expression, purification and activity verification of PD-L1 nanobody in Escherichia coli |
| 投稿时间：2025-02-25 修订日期：2025-03-14 |
| DOI： |
| 中文关键词: 纳米抗体 信号肽 大肠杆菌 蛋白纯化 |
| English Keywords:αmPD-L1 nanobody signal peptide Escherichia coli (E. coli) protein purification |
| Fund Project: |
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| 中文摘要: |
| 目的 驼源和鲨鱼源纳米抗体具有分子量小,亲和力高、稳定性好并可利用大肠杆菌表达系统重组表达等优势,但其在大肠杆菌胞内表达时存在二硫键形成困难的问题,本文旨在提高原核表达系统制备抗PD-L1纳米抗体的生物活性,同时避免内毒素污染。方法 构建αmPD-L1纳米抗体的BL21及Nissle 1917(EcN)分泌表达系统,选用信号肽pelB和yebF增强αmPD-L1抗体在发酵液上清中的分泌效率；通过改变诱导剂L-阿拉伯糖的浓度,进一步优化抗体分泌情况；采用镍离子亲和层析技术,对发酵液上清中的蛋白进行纯化；利用ELISA方法检测纯化后抗体的结合活性；构建荷瘤小鼠模型,验证αmPD-L1纳米抗体的抗肿瘤作用。结果 成功构建了αmPD-L1纳米抗体在BL21及EcN菌株中的分泌表达系统。重组的ECN菌株在含有0.5% L-阿拉伯糖的培养基中生长时,发酵液上清中的αmPD-L1纳米抗体表达量最高,约17.6 mg/L,镍离子亲和纯化后蛋白回收率为71.15%,最终得到12.5 mg αmPD-L1纳米抗体；ELISA检测结果显示,分泌表达的αmPD-L1纳米抗体的EC50为8.21 ng/ml；腹腔注射αmPD-L1组小鼠肿瘤体积明显减小,且与对照组小鼠相比,体重无明显差异。结论 本研究通过EcN分泌表达系统成功纯化了αmPD-L1纳米抗体,该抗体展现出更高的抗原结合活性和抗肿瘤作用。本研究为开发高活性、安全的αmPD-L1纳米抗体奠定了坚实的基础。 |
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